细胞介绍
K562/ADR为由K562细胞构建的耐ADR药物细胞株。
细胞特性
1)来源:人慢性髓系白血病细胞耐药筛选 2)形态:淋巴母细胞样;圆形,悬浮生长
3)含量:>1×106 细胞数 4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
细胞运输、保存及注意事项
复苏细胞 冻存细胞
包装 充液的T25细胞培养瓶 1mL冻存管
运输条件 常温 干冰
保存方式 37℃恒温细胞培养箱 -80℃冰箱中保存过夜后转入液氮或立即复苏
※注意事项 1. 收到细胞后,若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染;或冻存管有破损,融化、漏液等,请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观,显微镜下细胞照片(100倍,200倍各2张);2. 复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基,血清浓度较低,收到细胞后请及时更换为完全培养基;3. 建议收到细胞后,首先进行扩增(至少3代),并冻存部分细胞以备用。4. 初次培养,当细胞密度达8×105个/mL时,可加入500ng/mL ADR的完全培养基培养,至细胞细胞密度达1×106个/mL后传代。细胞传代1~2次后仍能保持增殖,即可提高药物浓度至1ug/mL继续培养;若此过程中细胞停止增殖,且状态较差,则需降低药物浓度(首次降低一半药物浓度)或使用不含药物的完全培养基培养,至细胞密度达8×105个/mL,且生长状态较好时,再更换为所需的ADR药物浓度。5. 细胞冻存过程中,不可添加药物。
细胞培养试剂的配制
1)ADR药物的配制及保存
建议将ADR药物配制成1mg/mL的母液,即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR药物,使其完全溶解后,使用0.22um滤器过滤除菌。
注意:可根据用量配置药物,并将药物分装保存,避免反复冻融导致药物失效。溶解后的ADR,4℃保存1周,-20℃保存1个月,-80℃保存6个月。
2)冻存液的配制
90%优质胎牛血清+10%DMSO,现用现配。(冻存液中不含药物)
3)完全培养基的配制
成分 体积/浓度
优质胎牛血清 10%
双抗 1%
1ug/mL ADR 0.1%母液(1mg/mL)
RPMI-1640培养基 补充至所需体积
细胞培养条件
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%~80%。
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